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伯樂bio-rad轉(zhuǎn)印槽的優(yōu)點和使用前后的注意事項

更新時間:2020-06-27  |  點擊率:3450
   伯樂bio-rad轉(zhuǎn)印槽的優(yōu)點:
  1小時內(nèi)轉(zhuǎn)印2塊10x7.5cm凝膠;也可以進(jìn)行低強(qiáng)度的隔夜轉(zhuǎn)印。
  電極絲相距4cm以產(chǎn)生強(qiáng)電場保證高效的蛋白轉(zhuǎn)印。
  彩色標(biāo)記的轉(zhuǎn)印夾和電極確保轉(zhuǎn)印過程中凝膠的正確定向。
  藍(lán)色致冷芯可*置于bio-rad轉(zhuǎn)印槽內(nèi),在快速轉(zhuǎn)印過程中吸收熱量。
  既可作為完整的獨立設(shè)備,也可作為一個模塊與緩沖液槽和蓋兼容。
 
  伯樂bio-rad轉(zhuǎn)印槽使用前后的注意事項:
  1、轉(zhuǎn)印前準(zhǔn)備:在電泳結(jié)束前30分鐘應(yīng)開始準(zhǔn)備工作在電泳過程中,提前準(zhǔn)備轉(zhuǎn)印所需物品:根據(jù)轉(zhuǎn)印所用膠的大小,剪一稍比膠大一些的厚濾紙和一剛好大小的厚濾紙,將此兩張膜浸入電轉(zhuǎn)印液中;再剪四張大小為5cm×2cm的PVDF膜,左下角剪去一角,將此膜浸泡在甲醇溶液中不超過1min后取出浸入ddH2O中1min,取出浸入轉(zhuǎn)印液中(切濾紙和膜時一定要戴手套,因為手上的蛋白會污染膜)(如果是NC膜,則用鑷子捏住膜的一邊輕輕置于有超純水的平皿里,要使膜浮于水上,只有下層才與水接觸。這樣由于毛細(xì)管作用可使整個膜浸濕。若膜沉入水里,膜與水之間形成一層空氣膜,這樣會阻止膜吸水,靠毛細(xì)作用自然吸水后再*浸入水中10min以排除氣泡,隨后浸泡入轉(zhuǎn)移液中)
 
  2、轉(zhuǎn)印結(jié)束,將膜從電轉(zhuǎn)槽中取出,TBST稍加漂洗3次,每次5-10min;爾后浸沒于封閉液中緩慢搖蕩1h。封閉是將轉(zhuǎn)印膜上坑坑洼洼的地方用BSA或脫脂奶粉填平,降低抗體的非特異性吸附產(chǎn)生很濃的背景。常用5%BSA和脫脂奶封閉,若是做磷酸化蛋白,只能用BSA,因為,奶中含有磷酸化蛋白。而封閉液濃度,可根據(jù)實驗需摸索條件。蛋白面朝上,封閉2h,搖床速度不超過40,結(jié)束后直接進(jìn)一抗。
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